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　　細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)
 

　　操作步驟(僅供參考)：
 

　　(一)、MDC單獨(dú)染色：
 

　　1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
 

　　2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。
 

　　3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度10 6 /ml。
 

　　4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。
 

　　5、 室溫避光染色15～45min。
 

　　6、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞2次，棄上清。
 

　　7、 加入100μl的Collection buffer重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。
 

　　8、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長355nm，阻斷濾光片波長512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。
 

　　細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)
 

　　(二)、與EB雙染色：
 

　　1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
 

　　2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。
 

　　3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度10 6 /ml。
 

　　4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混 勻。
 

　　5、 滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。
 

　　6、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。
 

　　注意事項(xiàng)：
 

　　1、 MDC Stain和EB試劑有一定毒性，請(qǐng)小心操作。
 

　　2、 吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
 

　　3、 操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。
 

　　4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
 

　　相關(guān)文獻(xiàn)：
 

　　《Effect of Gpx3 gene silencing by siRNA on apoptosis and autophagy in chicken cardiomyocytes.》 作者:Yafan Gong  Jie Yang  Jingzeng Cai  Qi Liu  Jun min Zhang  Ziwei Zhang 期刊:J. Cell. Physiol. 影響因子:4.522 PMID:30515791
 

　　《Upregulation of DAPK2 ameliorates oxidative damage and apoptosis of placental cells in hypertensive disorder complicating pregnancy by suppressing human placental microvascular endothelial cell autophagy through the mTOR signaling pathway》 作者:Yan Wang,Lian-Lian Liu,Yuan Tian,Yang Chen,Wen-Hui Zha,Yang Li,Fu-Ju Wu 期刊:Int. J. Biol. Macromol. 影響因子:4.784 PMID:30243997
 

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