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產(chǎn)品名稱(chēng):AO熒光染色試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):CA1142

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):產(chǎn)品名稱(chēng):AO熒光染色試劑盒
儲(chǔ)存條件2-8℃,避光,有效期6個(gè)月
規(guī)格100T
單位盒

免費(fèi)咨詢:010-50973130

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CA1142AO熒光染色試劑盒的詳細(xì)資料:

AO熒光染色試劑盒

產(chǎn)品內(nèi)容:



100T      

Storage

試劑(A): AO Stain      

500μl      

4℃ 避光      

試劑(B): AO Stain Buffer(10×)

10ml

4℃

產(chǎn)品說(shuō)明

AO屬于三環(huán)雜芳香燃料,可以標(biāo)記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性,能透過(guò)細(xì)胞膜,使核DNA和RNA染色。因此AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)。AO與核酸結(jié)合方式主要有:1、插入性結(jié)合,AO嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間,這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合,其熒光發(fā)射峰為530nm,激發(fā)后呈綠色熒光;2、靜電吸引,帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合,這種結(jié)合方式主要為AO與RNA的結(jié)合,其熒光發(fā)射峰為640nm,激發(fā)后呈紅色熒光,少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,AO嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色,與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)發(fā)桔黃色或橙紅色熒光。

AO熒光染色試劑盒(AO Detection Kit)主要由AO Stain、AO Stain Buffer組成,常用于細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。染色后在熒光顯微鏡下觀察,AO可透過(guò)正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。AO使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。AO染色常與EB染色合用雙染,EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

自備材料:

        熒光顯微鏡, 低速離心機(jī),PBS,細(xì)胞計(jì)數(shù)板, 載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考):

(一) AO單獨(dú)染色

1、 收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),應(yīng)先固定細(xì)胞),用AO Stain Buffer(1×)清洗細(xì)胞1次,加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。

2、 取適量的細(xì)胞懸液和AO Stain,按照細(xì)胞懸液:AO Stain=19:1的比例混合,輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察,一般取95μl細(xì)胞懸液和5μl AO Stain混合即可。

3、 室溫避光染色15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。

4、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)488nm,阻斷濾光片波長(zhǎng)515nm),計(jì)數(shù)并拍照。

染色結(jié)果:

正常細(xì)胞      

細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光      

凋亡細(xì)胞      

染色質(zhì)濃縮,細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀,被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒      

(二) AO/EB雙染色

1、 收集細(xì)胞,用AO Stain Buffer(1×)清洗細(xì)胞1次,加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。

2、 取適量的細(xì)胞懸液和AO Stain,按照細(xì)胞懸液:AO Stain=19:1的比例混合,并加入適量EB染色液,輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察,一般取95μl細(xì)胞懸液和5μl AO Stain混合即可。

3、 室溫避光染色15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片

4、 熒光顯微鏡濾光片515nm觀察,計(jì)數(shù)并拍照。

染色結(jié)果:

正常細(xì)胞      

均勻染成綠色熒光      

壞死細(xì)胞      

細(xì)胞桔黃色熒光

凋亡細(xì)胞      

染色質(zhì)濃縮,細(xì)胞核碎裂,被染成大小不一、致密濃染的黃綠色顆粒或見(jiàn)胞質(zhì)芽狀突起。

計(jì)算細(xì)胞凋亡率和死亡率:

細(xì)胞死亡率=凋亡細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%   細(xì)胞壞死率=壞死細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%

注意事項(xiàng):

      1. AO染色常不EB染色合用,可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

      2. 如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳,同時(shí)應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

      3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。



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